植物是生命的主要形態之一,包含了如樹木、灌木、藤類、青草、蕨類、及綠藻、地衣等熟悉的生物。種子植物、苔蘚植物、蕨類植物和擬蕨類等植物中,據估計現存大約有 350 000個物種。綠色植物大部分的能源是經由光合作用從太陽光中得到的,溫度、濕度、光線是植物生存的基本需求。植物共有六大器官:根、莖、葉、花、果實、種子。植物具有光合作用的能力——借助光能及葉綠素,利用水、無機鹽和二氧化碳進行光合作用,釋放氧氣,產生葡萄糖等有機物,供植物體利用。
植物莖尖培養
1、外植體的選取及預處理
⑴外植體選取
選取生長健壯、已發芽、長勢較好、無病害的生姜根狀莖作為外植體。
⑵材料預處理
取帶芽的枝條或鱗莖球莖,洗衣粉適量沖洗,然后扳取或用清潔剪刀剪取帶芽部位(約1cm×1cm大?。?,頂芽和腋芽、大芽和小芽分開。繼續用洗衣粉清洗10分鐘,清洗時需不?;蝿?。再用自來水沖洗干凈,置空培養瓶備用。
2、超凈工作臺無菌操作準備
檢查超凈工作臺,是否已開機滅菌,酒精燈、酒精瓶、升汞是否齊備、無菌水、培養瓶放置與位置、接種器械是否齊備與放置。
3、外植體消毒
⑴蒸餾水沖洗
外植體置于已殺菌開機的超凈工作臺上,新潔爾滅洗液消毒雙手,無菌蒸餾水清洗外植體2-3次,需隨時晃動。
⑵酒精消毒
75%酒精倒入裝外植體的容器內,消毒外植體5-60s,時間長短視植物材料情況而定,一般幼嫩材料和室內帶菌培養材料消毒時間短,老材料或室外材料消毒時間長。動作一定迅速,需晃動,然后將酒精倒去。整個時間計算以酒精傾倒開始至酒精倒出瓶外為止,
⑶升汞消毒
1%生汞倒入裝外植體的容器內,消毒外植體5-10min,時間長短視情況而定。需晃動,在最后3min靜置,升汞注滿容器,將已灼燒的鑷子放入容器升汞內浸泡。
10%次氯酸鈉溶液倒入裝外植體的容器內,消毒外植體10-12min,時間長短視情況而定。
⑷蒸餾水清洗
用鑷子將外植體取出,放入另一無菌蒸餾水瓶中清洗,反復清洗4次。
4、材料的整理
用灼燒冷卻的鑷子和剪刀對外植體進行處理,剝離外植體材料芽外部小葉片,露出尖端生長點和2-3片葉原基部分,將此部分剪下做培養材料。再用無菌蒸餾水清洗3-4次。
5、接入培養基
培養基瓶放入工作臺內,將剝離的材料分別用消毒過的鑷子放入培養瓶內,蓋上瓶蓋,置培養籃內,寫上培養時間、操作人及培養品名,入培養室培養。
6、整理工作
清潔整理超凈工作臺和實驗室。
(五)實踐指導
1、操作中嚴格有菌觀念、無菌操作。
2、操作前一定先換上工作服、專用鞋、清潔雙手。
3、超凈工作臺工作前,檢查工作臺是否開啟紫外燈和風機,酒精燈、消毒器械的酒精、消毒液是否準備齊備。蒸餾水、培養基是否齊備。
4、工作時培養基、蒸餾水、消毒液等放置齊整,器械取出后放入消毒液里,用過的溶液、線和報紙放在工作臺外。
5、接種工具不能碰觸瓶口和工作臺其它部位,手不能碰觸瓶口,更不能伸入瓶內,不能碰觸材料。
6、無菌水和酒精、升汞處理材料時需不斷晃動,便于材料與液體充分接觸。
7、酒精、升汞處理材料時間必須適宜,時間短消毒效果不理想,時間長會將材料殺死。
8、操作細致,水不要灑在工作臺上,掉落在臺面的材料不能再用。
9、操作完畢,須在瓶上注明日期、操作人,便于觀察。
10、有些同學器械放置很亂,整個超凈工作臺面亂七八糟,影響效果。